湖南永齐化工有限公司

新闻中心

News center

点击返回首页

新闻中心
Tips:如何配制合适的buffer?
发布日期[2022/10/20]

生物系统对pH的变化非常敏感,PH的变化可能改变或甚至终止正在进行的实验。 因此,配制有效的保持实验pH稳定的缓冲液对实验的成功至关重要。 

建立一个良好的缓冲体系,主要要考虑以下标准: 

  1. pKa

大多数生物反应发生在PH 6-8之间,因此理想的缓冲液需要具有在该范围内的pKa值,以提供最大缓冲能力。 大多数缓冲液在20℃,1个pKa单位内的pH下能最好地工作。 如果你认为你的实验会降低反应的pH值,那么选择一个pKa值略低于工作pH值的缓冲液。 同样,如果您希望实验提高您的工作pH,请选择pKa略高的缓冲液。

 

2. 溶解性

缓冲液应非常易溶于水,在非极性溶剂(脂肪,油和有机溶剂)中极少溶解。 这防止缓冲液积累在细胞膜,囊泡和其他非极性区室中。

 

3. 膜不渗透性

缓冲液不应该容易地通过细胞膜 ,这可以减少缓冲液在亚细胞结构中不成比例的累积。

 

4. 最小盐效应

盐虽可以调节化合物的缓冲能力,但高离子缓冲液可引起生物系统的问题或其它反应。 如:在钙依赖的反应中应该避免柠檬酸盐和磷酸盐缓冲液(Tris也能螯合钙)。

 

5. 对解离的影响

缓冲液浓度、温度和离子强度应当对缓冲液的解离具有最小的影响。

 

6. 离子强度

确保你的缓冲液对你的实验环境的离子浓度没有太大的影响,正常生理离子强度为:100-200mM的KCl或NaCl。 一些缓冲液,如磷酸盐,可以显著影响溶液中离子的浓度。

 

7. 阳离子相互作用

如果缓冲液和阳离子配体形成复合物,该复合物应是可溶的。 理想情况是,至少一些缓冲化合物不会形成复合物。

 

8. 稳定性

缓冲液应当是化学稳定的,抵抗酶促和非酶促降解

 

9. 生化惰性

缓冲液不应影响或参与任何生化反应。

 

10. 光吸收

缓冲剂不应吸收波长在230nm和700nm之间的可见光或紫外光。 这防止了对分光光度测定的干扰。

返回主目录
湖南永齐化工有限公司 版权所有©2023 网络支持 中国化工网 全球化工网 生意宝 著作权声明    备案号:湘ICP备2021008147号
 
点击这里给我发消息
在线询价